作為哺乳動物最大的器官，皮膚是動物與外界環(huán)境間最主要的物理屏障；由于生活習(xí)性和所處的外界環(huán)境不同，皮膚的功能和表面的微生物組成等都會發(fā)生變化。同時，皮膚又是獨特的免疫器官，在維持穩(wěn)態(tài)和抵抗各種病理條件時，發(fā)揮獨特的免疫功能。皮膚組織內(nèi)包含如朗格漢斯細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞。在單細(xì)胞測序應(yīng)用領(lǐng)域，研究者往往需要對皮膚組織內(nèi)的不同細(xì)胞亞群進(jìn)行分類，并在不同疾病模型下定位靶細(xì)胞，同時在進(jìn)行腫瘤類研究時（如黑色素瘤和鱗狀細(xì)胞癌等）也需要對腫瘤亞型及細(xì)胞的識別。

只有制備高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液才能保證下游實驗的順利進(jìn)行，但是常規(guī)手工解離皮膚組織，不但費時，且獲得的細(xì)胞懸液碎片高，產(chǎn)量低，同時還易結(jié)團(tuán)，細(xì)胞活性差，嚴(yán)重影響下游研究的開展，如單細(xì)胞測序。因此在進(jìn)行皮膚組織單細(xì)胞懸液制備時，需要更加簡單快捷的方法，在提高實驗效率同時，又能保證實驗樣本的質(zhì)量。

瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀，通過組織處理管機械剪切，配合酶解試劑盒和內(nèi)置的處理程序及溫控系統(tǒng)，只需將樣本放入，設(shè)好程序，即可輕松獲得高質(zhì)量皮膚單細(xì)胞懸液，獲得的細(xì)胞可直接用于后續(xù)實驗，如單細(xì)胞測序、原代細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞分選等。

有了高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液后，高效穩(wěn)定且高性價比的單細(xì)胞測序平臺將保障下游實驗結(jié)果的質(zhì)量與大規(guī)模應(yīng)用的可能。達(dá)普生物Galaxy單細(xì)胞建庫平臺基于專利的微流控油包水單細(xì)胞包裹技術(shù)與微球編碼配套技術(shù)，可快速實現(xiàn) 1-4 樣本的單細(xì)胞測序文庫構(gòu)建。經(jīng)過生信分析軟件 StarScope處理后，表達(dá)矩陣結(jié)果兼容幾乎所有下游生信分析軟件，輕松得到單細(xì)胞測序?qū)嶒灁?shù)據(jù)。

下面為大家展示一下，瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀和達(dá)普生物單細(xì)胞建庫平臺無縫對接的樣本制備與單細(xì)胞建庫測序結(jié)果。

單細(xì)胞懸液制備

樣本：小鼠耳部皮膚、背部皮膚。

制備方法：

1. 試劑準(zhǔn)備

使用試劑盒中配套的Buffer將酶A、B、C分別充分溶解。

2. 樣本準(zhǔn)備

將剪下的小鼠背部皮膚置于冷PBS緩沖液中，用手術(shù)剪或手術(shù)刀的閉合圓邊尖端分離皮膚樣本后清洗3遍；耳部皮膚去除無毛部分，用鑷子將背腹側(cè)分開，用鑷子輕輕刮耳朵內(nèi)側(cè)，去除殘留軟骨，然后將皮膚切成約1cm2的組織塊。

3. 程序處理

將組織塊和酶mix放入組織處理管，安裝加熱套，運行加熱程序 “M_Skin_Heater_1”。

4. 單細(xì)胞懸液收集

程序運行結(jié)束后，用潤濕后的40 μm細(xì)胞濾器過濾細(xì)胞懸液樣本，50 mL離心管收集細(xì)胞懸液，500×g離心8min，徹底棄掉上清后，用適當(dāng)緩沖液重懸后用于單細(xì)胞測序、流式細(xì)胞術(shù)或原代細(xì)胞培養(yǎng)等。

單細(xì)胞測序結(jié)果

達(dá)普生物先對上述懸液進(jìn)行成像質(zhì)檢，并選取背部皮膚組織單細(xì)胞懸液，用其自主研發(fā)的Galaxy單細(xì)胞建庫平臺及配套的轉(zhuǎn)錄組試劑盒進(jìn)行單細(xì)胞建庫測序。

測序結(jié)果

1）達(dá)普StarScope軟件分析結(jié)果：

2） UMAP聚類分析：

與發(fā)表文獻(xiàn)對比，所有細(xì)胞類群能夠mapping，比例高度相似，并且線粒體基因百分較低，證實利用達(dá)普Galaxy 對皮膚組織樣本單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組測序的可行性及瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀解離的皮膚組織樣本可直接對接達(dá)普Galaxy單細(xì)胞建庫系統(tǒng)。

以上單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄測序結(jié)果顯示：通過瑞沃德自動單細(xì)胞懸液制備系統(tǒng)制備的皮膚組織樣本可以直接用于達(dá)普Galaxy單細(xì)胞建庫平臺，不但縮短樣本懸液制備時間，同時高質(zhì)量的懸液質(zhì)量，減少了單細(xì)胞建庫過程中樣本優(yōu)化及減少一些碎片對反轉(zhuǎn)錄的影響，保證了建庫質(zhì)量，整體上縮減了整個單細(xì)胞建庫測序周期， 驗證了瑞沃德與達(dá)普Galaxy產(chǎn)品的高兼容性。

實驗使用產(chǎn)品

瑞沃德單細(xì)胞懸液制備儀

1.標(biāo)準(zhǔn)流程，提高實驗可重復(fù)性

2.可配置加熱套實現(xiàn)自動樣品處理

3.多通道獨立工作，可同步處理不同組織，節(jié)約實驗時間

4.一機兩用，同時可進(jìn)行組織勻漿

Galaxy星海單細(xì)胞測序建庫系統(tǒng)

1.性能優(yōu)：可一次性完成數(shù)百至數(shù)萬個細(xì)胞的分離，基因檢測靈敏度高。

2.上樣活：1-4 通道，可靈活選擇樣本數(shù)及細(xì)胞數(shù)量，方便快捷。

3.兼容好：文庫兼容 主流國產(chǎn)與國外測序平臺。

4.分析全：自主開發(fā)的 StarScope 生信分析軟件，可完成從原始數(shù)據(jù)到分析報告的生信分析。

5.流程活：可接駁下游流程 ，如單液滴分選。

瑞沃德 & 達(dá)普生物強強聯(lián)合

瑞沃德與達(dá)普生物在單細(xì)胞測序市場的業(yè)務(wù)上下游互補關(guān)系，瑞沃德在單細(xì)胞懸液制備領(lǐng)域沉積多年經(jīng)驗并組建了龐大的研發(fā)團(tuán)隊，推出了單細(xì)胞懸液制備儀及配套試劑盒， 其可快速對組織樣本進(jìn)行高質(zhì)量的單細(xì)胞懸液制備，上市以來廣受客戶好評，有效解決了單細(xì)胞測序中的前端組織樣本單細(xì)胞懸液制備難題，為單細(xì)胞測序建庫提供前期保障，瑞沃德與達(dá)普生物雙方強強聯(lián)合，致力于打通單細(xì)胞測序上測序儀之前的各環(huán)節(jié)關(guān)卡，保證單細(xì)胞測序質(zhì)量，共同深耕單細(xì)胞測序領(lǐng)域。