單細胞樣本制備老失??？

流式實驗得到數(shù)據(jù)不可靠？

流式圖不知道怎么分析？

「全線賦能“沃”的實驗」之實驗方法實戰(zhàn)教程

直播第四期將帶來

《流式細胞術(shù)》

從單細胞制備到流式細胞術(shù)，理論+實例

帶你快速get到其中的難點要點

直播時間

5月31日（周二）19：00

報名方式

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主題：單細胞懸液樣本的分類及制備

① 單細胞懸液樣本類型

② 制備注意事項

③ 制備方法實例

講師：馮啟崢

瑞沃德高級產(chǎn)品方案經(jīng)理，專注動物傳染病學(xué)和細胞與分子免疫學(xué)研究多年，在動物疫苗研發(fā)、CRISPR的原核細胞應(yīng)用方面有著較為豐富的經(jīng)驗，致力于為客戶提供專業(yè)的細胞與分子生物研究方案。

主題：流式細胞術(shù)的原理及應(yīng)用

① 儀器基本結(jié)構(gòu)解析

② 實驗方法實操講解

③ 技術(shù)應(yīng)用介紹

講師：方晟

昆明理工大學(xué)碩士研究生，已發(fā)表SCI論文4篇，在載體構(gòu)建、藥物活性篩選、腫瘤模型構(gòu)建、單細胞數(shù)據(jù)分析等方面有著豐富的經(jīng)驗，研究方向主要是抗腫瘤藥物的抗癌機理和單細胞測序分析。

上期直播間互動問題

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1、做外周神經(jīng)損傷的小鼠能活多久？如何飼養(yǎng)？

外周神經(jīng)損傷一般不會造成動物的死亡，但一些特殊情況會影響動物的存活率，比如為了避免在手術(shù)部位引起不良組織炎癥，我們應(yīng)該盡量縮短手術(shù)時間，如果手術(shù)部位意外出血，要用棉簽適當(dāng)按壓。如果出血沒有停止，就不要對這只動物進行進一步的實驗。術(shù)后動物應(yīng)該放進干凈的鼠籠并分籠飼養(yǎng)，注意保溫。

2、脊髓損傷造模后，動物出現(xiàn)功能障礙不能自主排尿該如何護理？

每日按壓排尿3次，以防泌尿系統(tǒng)感染；連續(xù)3天，每天兩次向腹腔注射相同劑量青霉素預(yù)防感染。

3、使用纖維蛋白膠修復(fù)的是外周神經(jīng)損傷的哪個類型或者說等級呢?

纖維蛋白膠可以應(yīng)用于橫斷的神經(jīng)，幫助受傷神經(jīng)的近端和遠端殘端緊密對齊，是神經(jīng)縫合技術(shù)的一種替代方式。

4、坐骨神經(jīng)擠壓的結(jié)扎力度如何把控？

有一些文獻上會使用帶有力值的工具進行擠壓神經(jīng)，如果我們沒有這類的工具，可以使用血管夾對神經(jīng)進行夾持，保證力度的一致性。

5、有專門評估大小鼠前肢抓取能力的行為學(xué)實驗嗎?

針對于前肢的抓取能力，爪抓力測試儀可以測動物前肢，后肢的抓力，另外如果是判斷動物前肢抓取食物的精細運動，可以用樓梯式抓取測試儀來進行。

6、目前好像2D步態(tài)分析居多，慢慢也看到了3D步態(tài)分析，兩者相比各自有什么優(yōu)缺點呢?

步態(tài)沒有2D、3D的區(qū)別，國內(nèi)使用較多的步態(tài)有2種：第一種是依靠壓力感應(yīng)可以生成動物腳掌受力的情況，判斷動物的損傷情況；第二種是通過視頻記錄動物足部在運動時的軌跡，通過足部的運動過程計算生成動物活動過程中四肢運動的各項指標(biāo)來判斷動物的損傷情況。這兩種方法從2個不同的方面完善了步態(tài)的分析數(shù)據(jù)，但實際上無法互相替代。一般來說大鼠步態(tài)用第一種壓力感應(yīng)測試的會多一些，小鼠步態(tài)則用視頻記錄的多一些。所謂的3D步態(tài)是通過從側(cè)面拍攝動物運動時的腿部活動，對動物的步態(tài)運動進行更為細致的評估，與傳統(tǒng)步態(tài)記錄的是2個維度的信息，無法進行替代。由于需要識別動物腿部的關(guān)節(jié)，目前無法與足底步態(tài)很好的融合結(jié)果。

7、這種轉(zhuǎn)棒實驗是可以大小鼠通用的嗎？如何檢測到掉落？

轉(zhuǎn)棒大小鼠主機通用，但是跑道是需要替換的。設(shè)備通過紅外感應(yīng)，電子感應(yīng)等自動檢測動物掉落情況，停止計時。

8、外周神經(jīng)損傷會導(dǎo)致疼痛致敏，在模型檢測中可以用什么疼痛檢測方法呢？

主要看測痛的部位，機械痛一般可以用vonfery針或電子測痛儀來進行測試，針對不同部位也有面部疼痛測試儀（三叉神經(jīng)），壓感測痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測痛儀（整個腳，細小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測試動物足底或尾部，使用紅外測痛儀或者甩尾測痛儀。

9、怎么手動排尿？

按摩膀胱。

10、每天需要按摩多久？

術(shù)后需輕輕按摩擠壓膀胱進行排尿，每次按摩到排空，每天至少三次。

11、不規(guī)則梯和錯步分析儀是不是指一個東西??？

是一種類型的儀器，不同廠家的名稱，測試方法，輸出的指標(biāo)會略有不同。

12、轉(zhuǎn)棒實驗一直做不出差異怎么辦？

可能有2種原因：

①測試時動物已經(jīng)恢復(fù)到與正常鼠一致的水平，所以做不出差異。 

解決方法：將轉(zhuǎn)棒測試時間提前。

②測試難度過于簡單或者過于困難，導(dǎo)致差異很小，從而統(tǒng)計分析結(jié)果無差異。

解決方法：調(diào)整實驗難度，直到可以做出差異的結(jié)果。新型轉(zhuǎn)棒儀除了原先的勻速和勻加速以外還增加了階段加速等測試方法，實驗難度有了更大的調(diào)整空間。

13、兩爪及四爪攀爬實驗有合適的實驗設(shè)備嗎？

不規(guī)則梯結(jié)合自制實驗設(shè)備。

14、脊髓損傷后有哪些評估手段？

脊髓損傷后可通過行為學(xué)對運動及感覺進行評估。BBB法：一般用于觀察大鼠后肢行走及肢體活動，評分分為三個部分，0-7分評判動物后肢關(guān)節(jié)活動情況，8-13分評判后肢步態(tài)及協(xié)調(diào)功能，14-21分評判運動中爪的精細活動；BMS評分是在BBB評分基礎(chǔ)上針對小鼠的運動特點做出了完善和修改，是專門用于小鼠后肢功能的評分方法。其他運動相關(guān)行為學(xué)：步態(tài)分析系統(tǒng)用于評估步態(tài)動力學(xué)、協(xié)調(diào)性分析、平衡性分析等；轉(zhuǎn)棒儀可評估動物的運動協(xié)調(diào)性；行走障礙分析儀可分析簡單步態(tài)及運動協(xié)調(diào)性等。感覺功能相關(guān)行為學(xué)：Vonfrey測痛針用于評估對觸碰的敏感性；冷熱盤用來測試動物對冷熱刺激的敏感度。

15、平衡木也可以做小鼠嗎 ？

有小鼠平衡木可以進行小鼠實驗。

16、請問外周神經(jīng)損傷后有哪些手段可以評價感覺功能的損失？

感覺功能相關(guān)行為學(xué)：機械痛一般可以用vonfery針或電子測痛儀來進行測試，評估對觸碰的敏感性，針對不同部位也有面部疼痛測試儀（三叉神經(jīng)），壓感測痛儀（背部，較大的關(guān)節(jié)），鉗式測痛儀（整個腳，細小的關(guān)節(jié)），熱痛一般測試動物足底或尾部，使用紅外測痛儀（用于量化對小鼠和大鼠后爪輻射或紅外熱刺激的熱閾值的方法）或者甩尾測痛儀（一種基于對嚙齒動物中熱刺激回避反應(yīng)的潛伏期測量的疼痛實驗）。

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